注意事項(xiàng)：

1、注意無(wú)菌操作

2、細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)融化凍存細(xì)胞速度要快，防止細(xì)胞損傷，細(xì)胞復(fù)蘇后的操作在適宜溫度中進(jìn)行，減少冷凍保護(hù)劑對(duì)細(xì)胞的毒性。

3、為了避免復(fù)蘇過程中細(xì)胞液中有冰晶的出現(xiàn)，破壞細(xì)胞膜及細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)。從液氮拿出來(lái)，要快速丟入37度水浴，等細(xì)胞液剛剛化完取出，加培養(yǎng)液稀釋。

4、細(xì)胞放入水浴中注意用鑷子夾住細(xì)胞凍存管并在水浴中不時(shí)晃動(dòng)，使其受熱均勻，并防止水浴時(shí)水進(jìn)入細(xì)胞凍存管污染細(xì)胞。打開細(xì)胞凍存管之前要用酒精棉球?qū)龃婀芟静⒘栏伞?/p>

5、液氮一定的危險(xiǎn)性，打開液氮罐取出細(xì)胞時(shí)，要注意防凍，戴防凍手套，防護(hù)眼睛。

6、如果凍存管密封不嚴(yán)，液氮可被吸入。由于解凍時(shí)凍存管中的氣溫急劇上升，將可能發(fā)生爆炸。復(fù)蘇過程中應(yīng)蓋上恒溫水浴鍋的蓋。

細(xì)胞復(fù)蘇后貼壁細(xì)胞較少的原因：

1、凍存細(xì)胞時(shí)消化時(shí)間過長(zhǎng)，導(dǎo)致細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)失去鐵壁能力。

2、細(xì)胞凍存液的質(zhì)量不好也會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

3、凍存液的量加的太多也不好。

4、凍存的時(shí)候把DMSO混均勻，會(huì)有一些影響，但不會(huì)太大。